重組兔單克隆抗體制備 服務(wù)編號(hào)：SV1600
本服務(wù)項(xiàng)目主要是根據(jù)客戶的要求制備兔單克隆抗體，兔單抗具有高特異性、強(qiáng)親和力的優(yōu)點(diǎn)。兔因其免疫系統(tǒng)發(fā)育的特殊性，能有效識(shí)別在小鼠中免疫原性低的抗原或半抗原。因此，與鼠單抗相比，兔單抗在科研、診斷和醫(yī)療多個(gè)領(lǐng)域有著更好的表現(xiàn)與廣泛的應(yīng)用，且有更高的親和力和特異性，可識(shí)別更多抗原表位，有更多的候選陽(yáng)性克隆，更易于人源化特點(diǎn)。
單B細(xì)胞抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)是通過(guò)流式分選技術(shù)，從免疫動(dòng)物或康復(fù)者外周血中分離抗原特異性B細(xì)胞，利用單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)從單一B細(xì)胞中提取抗體重、輕鏈基因，并將抗體基因序列插入高表達(dá)載體，從而實(shí)現(xiàn)抗體的高效開(kāi)發(fā)與表達(dá)。該技術(shù)獲得抗體重、輕鏈基因天然配對(duì)、易于改造，抗體親和力高。相比傳統(tǒng)方法（如雜交瘤技術(shù)），單B細(xì)胞抗體技術(shù)顯著縮短了開(kāi)發(fā)周期；能夠以較少的細(xì)胞量獲得更多的特異性單克隆抗體，且陽(yáng)性克隆數(shù)量顯著高于傳統(tǒng)方法。
噬菌體展示技術(shù)(Phage Display)是采用分子克隆技術(shù)從脾臟或外周血PMBC中提取抗體重、輕鏈基因，通過(guò)基因工程技術(shù)將抗體的重、輕鏈基因克隆至噬菌粒載體，將抗體基因與噬菌體外殼蛋白（如pIII）融合表達(dá)，使抗體展示在噬菌體表面，構(gòu)建噬菌體文庫(kù)，然后通過(guò)加壓篩選獲得高親和力的陽(yáng)性克隆。噬菌體文庫(kù)包括包括天然抗體庫(kù)、免疫抗體庫(kù)、人工改造的庫(kù)等，相比傳統(tǒng)抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)，噬菌體展示技術(shù)可以針對(duì)各種抗原的抗體，包括蛋白質(zhì)、多肽、細(xì)胞表面抗原等篩選和富集數(shù)百萬(wàn)個(gè)不同的抗體，極大地提高了篩選效率，并且保留了樣本中抗體種類的多樣性。噬菌體展示技術(shù)是一種高效、快速的抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)，具有高通量、高多樣性和易于操作的特點(diǎn)。通過(guò)直接展示抗體蛋白在噬菌體表面，該技術(shù)能夠快速篩選出高特異性和高親和力的抗體，廣泛應(yīng)用于治療性抗體開(kāi)發(fā)、診斷試劑制備和基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域。
Tip: 請(qǐng)您填寫項(xiàng)目申請(qǐng)表。以便Bioss為您提供更好的技術(shù)服務(wù)。
一、 服務(wù)流程
1、客戶提交重組兔單克隆抗體制備請(qǐng)求并明確對(duì)抗體的要求，與公司商定具體的制備項(xiàng)目、數(shù)量和費(fèi)用，雙方簽訂《委托單克隆抗體制備合同》。
2、客戶提供抗原或抗原信息，我公司按照合同要求安排重組兔單克隆抗體制備服務(wù)，并在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成制備委托。
3、抗體制備完成后，我公司按照客戶要求純化分裝，免費(fèi)低溫郵寄給客戶，同時(shí)提供抗體制備報(bào)告。
二、 樣品要求
1、客戶提供制備抗體所需蛋白或多肽片段，抗原純度＞85%，數(shù)量＞10mg，濃度＞1mg/ml。
2、客戶提供的抗原信息應(yīng)包含蛋白抗原的英文全稱、種屬信息、GeneID或序列信息；化合物抗原應(yīng)提供化學(xué)結(jié)構(gòu)式、活性基團(tuán)、溶解性等信息。
3、請(qǐng)?zhí)崆罢f(shuō)明樣品來(lái)源和生物危害等情況，或其他任何特殊情況。
三、兔單克隆抗體收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
1、單B細(xì)胞平臺(tái)
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服務(wù)項(xiàng)目 |
服務(wù)內(nèi)容 |
周期 |
收費(fèi) |
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抗原制備 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶聯(lián)蛋白10mg（抗原無(wú)毒性）， 乙方用于免疫動(dòng)物和檢測(cè) |
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b. 客戶提供多肽，博奧森偶聯(lián)載體蛋白 |
1周 |
詢價(jià) |
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c. 原核系統(tǒng)表達(dá)蛋白 |
4周 |
詢價(jià) |
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d. 設(shè)計(jì)、合成多肽、偶聯(lián)載體蛋白（15aa左右） |
2周 |
詢價(jià) |
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e. 磷酸化、甲基化修飾多肽、偶聯(lián)載體蛋白 （包括：設(shè)計(jì)修飾多肽兩條，分別合成及偶聯(lián)，未修飾多肽一條） |
2周 |
詢價(jià) |
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f. 特殊修飾多肽 |
4周 |
詢價(jià) |
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動(dòng)物免疫 血清檢測(cè) |
免疫2只新西蘭大白兔，免疫3-4次，血清效價(jià)采用間接ELISA法， 最終取一只達(dá)到效價(jià)>1:16000以上，可滿足單細(xì)胞分選 注：甲、乙雙方根據(jù)檢測(cè)結(jié)果最終判定是否項(xiàng)目需要繼續(xù)進(jìn)行 （結(jié)果要及時(shí)反饋）；甲方自行選擇是否進(jìn)行內(nèi)源性驗(yàn)證 |
4-6周 |
詢價(jià) |
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B細(xì)胞分選與培養(yǎng) |
選出免疫應(yīng)答最佳的1只兔子，從脾臟或全血中分離PBMC， 采用IgG陽(yáng)性和抗原特異性雙陽(yáng)性通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)（FACS） 分選記憶性單B細(xì)胞至10個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng) |
2周 |
詢價(jià) |
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陽(yáng)性克隆對(duì)篩選 及B細(xì)胞的測(cè)序 |
對(duì)經(jīng)培養(yǎng)的B細(xì)胞克隆進(jìn)行抗原ELISA篩選，陽(yáng)性B細(xì)胞上清供 甲方進(jìn)行測(cè)試，選取10株單克隆進(jìn)行單B細(xì)胞測(cè)序， 獲取抗體輕重鏈基因序列。
注：甲方自行選擇是否進(jìn)行內(nèi)源性驗(yàn)證 |
1-2周 |
詢價(jià) |
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陽(yáng)性克隆抗體的 重組表達(dá) |
將擴(kuò)增得到的抗體基因插入帶有恒定區(qū)基因的表達(dá)載體中， 然后選擇合適的表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)， 然后采用Protein A親和純化，最終每個(gè)兔單抗交付不超過(guò)50ug |
4周 |
詢價(jià) |
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抗體的擴(kuò)大培養(yǎng) 與純化 |
根據(jù)客戶選定的2-3株克隆，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)， 并通過(guò)親和層析等純化方法提純抗體
注：甲方自行選擇是否進(jìn)行內(nèi)源性驗(yàn)證 |
2周 |
詢價(jià) |
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產(chǎn)品交付 |
1、2-3個(gè)兔單克隆抗體100ug 2、2-3個(gè)挑選的兔單抗對(duì)應(yīng)的抗體序列 3、項(xiàng)目報(bào)告 |
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bioss
2、 噬菌體展示平臺(tái)
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服務(wù)項(xiàng)目 |
服務(wù)內(nèi)容 |
周期 |
收費(fèi) |
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抗原制備 |
a.甲方提供xxx蛋白抗原，或多肽偶聯(lián)蛋白10mg（抗原無(wú)毒性）， 乙方用于免疫動(dòng)物和檢測(cè) |
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b. 客戶提供多肽，博奧森偶聯(lián)載體蛋白 |
1周 |
詢價(jià) |
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c. 原核系統(tǒng)表達(dá)蛋白 |
4周 |
詢價(jià) |
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d. 設(shè)計(jì)、合成多肽、偶聯(lián)載體蛋白（15aa左右） |
2周 |
詢價(jià) |
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e. 磷酸化、甲基化修飾多肽、偶聯(lián)載體蛋白 （包括：設(shè)計(jì)修飾多肽兩條，分別合成及偶聯(lián)，未修飾多肽一條） |
2周 |
詢價(jià) |
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f. 特殊修飾多肽 |
4周 |
詢價(jià) |
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動(dòng)物免疫 血清檢測(cè) |
免疫2只新西蘭大白兔，免疫3-4次，血清效價(jià)采用間接ELISA法， 最終取一只達(dá)到效價(jià)>1:16000以上，可滿足繼續(xù)實(shí)驗(yàn)； 注：甲、乙雙方根據(jù)檢測(cè)結(jié)果最終判定是否項(xiàng)目需要繼續(xù)進(jìn)行 （結(jié)果要及時(shí)反饋） |
8-10周 |
詢價(jià) |
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B細(xì)胞收集 |
采集外周血，分離PBMC或取脾臟組織，提取總RNA， 采用RT-PCR制備cDNA |
1周 |
詢價(jià) |
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噬菌粒的構(gòu)建 與轉(zhuǎn)化 |
1、噬粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)化：以cDNA為模板、PCR擴(kuò)增兔輕、 重鏈可變區(qū)基因，兔VH、VL基因拼接噬菌粒載體， 電擊轉(zhuǎn)化TG1宿主菌，構(gòu)建噬菌體文庫(kù) 2、文庫(kù)鑒定：隨機(jī)挑選24個(gè)克隆，PCR鑒定陽(yáng)性率 3、文庫(kù)phage制備：文庫(kù)培養(yǎng)擴(kuò)增+輔助噬菌體侵染包裝， 表達(dá)成phage庫(kù) |
4-5周 |
詢價(jià) |
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噬菌體文庫(kù)篩選 |
1、采用固相篩選等多種方式，進(jìn)行親和篩選，篩選高親和力兔單抗 2、挑取96個(gè)克隆培養(yǎng)擴(kuò)增+IPTG誘導(dǎo)表達(dá)+ELISA檢測(cè)陽(yáng)性克隆 3、挑取全部陽(yáng)性克隆進(jìn)行基因測(cè)序 |
4-5周 |
詢價(jià) |
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表達(dá)抗體（備選） |
選擇真核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá) |
2-4周 |
詢價(jià) |
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抗體鑒定（備選） |
對(duì)純化后的抗體進(jìn)行最終鑒定，ELISA、WB、SPR等 |
1周 |
詢價(jià) |
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產(chǎn)品交付 |
1、實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括流程，檢測(cè)報(bào)告 2、陽(yáng)性克隆序列 3、陽(yáng)性菌株 4、噬菌體免疫文庫(kù) |
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bioss
